高能天津熒光顯微鏡的一個(gè)關(guān)鍵特征是它能夠檢測(cè)到相對(duì)于黑暗(通常是黑色)背景有時(shí)微弱可見(jiàn)或甚至非常明亮的熒光物體,為了優(yōu)化該特征,必須使用將在該部分引物中討論的原理來(lái)大化圖像亮度和分辨率。
高能天津熒光顯微鏡優(yōu)化圖像亮度的重要方面之一是確保為樣品提供足夠的光能,以便在適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)下激發(fā)附著在樣品上的每個(gè)發(fā)色團(tuán),同樣重要的是選擇適當(dāng)?shù)钠琳线^(guò)濾器以大化指向觀察管或攝像管的發(fā)射熒光量,諸如汞和氙燃燒器的高能光源將在非常窄的近紫外和可見(jiàn)光范圍內(nèi)提供大量的激發(fā)能量。當(dāng)這些光源的使用耦合到能夠傳輸所選波長(zhǎng)同時(shí)阻擋那些不希望的激發(fā)濾波器的適當(dāng)選擇時(shí),將滿足激勵(lì)的標(biāo)準(zhǔn)。
防止不需要的波長(zhǎng)進(jìn)入觀察管的阻擋濾光器的選擇是主要關(guān)注點(diǎn)。激發(fā)的總能量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于發(fā)射能量,因此選擇一種有效的屏障濾波器非常重要,它可以阻擋不需要的波長(zhǎng),同時(shí)允許樣品的熒光發(fā)射通過(guò)。選擇用于熒光的物鏡必須能夠在近紫外區(qū)域和整個(gè)可見(jiàn)光譜中有效地透射光。
高能天津熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡不同的是熒光顯微鏡增加了兩套濾光片。第一套稱為激發(fā)光濾片,裝在光源和樣品之間,只有那些能激發(fā)熒光材料發(fā)光的特定波長(zhǎng)的光才能通過(guò)。第二套稱為阻斷濾片,裝在物鏡和目鏡之間,只讓燃料所發(fā)出的熒光通過(guò)。在黑暗背景的襯托下,發(fā)出熒光的樣品很容易被觀察。